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從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的原則和注意事項
2025-09-02
在分子生物學實驗中，我們通常需要分離純化特定分子量的DNA片段，用于接下來的實驗，比如酶切、連接的工作。下面主要介紹從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的原則和注意事項，其主要原則有兩項：1、去除DNA樣品中的雜質：瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的，其中含有較多的酸根和羥基多糖。目前大多數級別的瓊脂糖中含有硫酸酯多糖，這種物質能抑制基因克隆中使用的多種工具酶的活性，如DNA限制性內切酶、連接酶等，在回收DNA時應盡量減少這些物質的污染。不管用哪種方法進行回收DNA，都會用到2.5mol/L...
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幾種感受態細胞的用途、基因型和特點
2025-09-02
1、DH5菌株用途:克隆菌，用于分子克隆、質粒提取。基因型:supE44△lacU169（?80lacZ△M15）hsdR17recAlendAlgyrA19thi-1relAl特點:一種用于鋪制與培養質粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其?80lacZ△M15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。recAl和endAl的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒的提取。2、TOP-10菌株用途：克隆菌，用于分子克隆，質粒提取。基因型：F_m...
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核酸電泳之聚丙烯酰氨凝膠電泳
2025-09-02
核酸電泳，想必大家耳熟能詳的就是瓊脂糖凝膠電泳了。今天我們要來講講另外一個跑核酸的方法--聚丙烯酰氨凝膠電泳。對于聚丙烯酰氨凝膠電泳，想必大家第一反應是蛋白質的電泳，再就是伯樂的電泳設備了。是的，蛋白電泳和伯樂電泳設備都是我們熟悉的。來看看DNA的聚丙烯酰氨凝膠電泳吧。看看膠的配置有什么不同呢？20%的變性聚丙烯酰胺凝膠8ml；尿素3.36g，加入45%丙烯酰胺溶液3.56ml，5XTBE1.6ml，加熱是尿素溶解,加水至8ml，將兩者混勻后冷卻至室溫。再加入3-6ul的TE...
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提取DNA的方法總結與比較
2025-09-02
dna提取是一項經常要做的實驗，下面我們就總結了四種dna提取方法并做詳細說明和比較。一.濃鹽法提取dna：A.利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來.B.也可用0.15MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯...
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索萊寶試劑盒提取植物dna步驟
2025-09-01
試劑盒提取植物dna已經獲得廣泛應用。各個生化試劑廠家也都有了dna提取試劑盒產品。索萊寶作為國內生化試劑供應商提供了各類dna提取試劑盒。今天給大家介紹試劑盒提取植物dna步驟。當然是以索萊寶產植物基因組dna提取試劑盒產品為例。使用前先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1、植物組織預處理：取新鮮植物組織（不超過100mg）或干重組織（不超過20mg），于液氮中充分研磨至細粉狀，讓液氮自然揮發。2、將研磨好的植物...
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RNAwait(非凍型組織RNA保存液)的作用
2025-09-01
RNAwait是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液，能使細胞內的RNA與RNA酶分離，可以快速可靠地保存動物組織、細胞內的RNA。組織獲取后立即浸入RNAwait保存液中，在室溫可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃標本可以長期保存，RNA穩定存在不降解，取出后用各類方法抽提可以獲得高質量的RNA。操作流程：1.根據要保存的各樣本的體積，計算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應當是組織體積的10倍（如100mg組織約用1mlRNAwait）。2.將RNA...
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索萊寶：細胞爬片制備詳細過程
2025-09-01
【爬片的準備】1.爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用爬片；2.應用蓋玻片，可根據自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪時可用前護士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后，稍用力一掰就分開了。如果接種大皿的話，我一般不將蓋玻片切開，直接清潔后放入培養皿中，到染色時再將之切開，這樣既保證了細胞均一性，又可同時做幾個指標的染色。3.將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸泡6小時...
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常用細胞固定液及優缺點比較
2025-09-01
細胞固定液作用是殺死細胞，固定細胞形態。下面列舉幾種常用細胞固定液及優缺點比較。1.冷丙酮可用于一般的免疫組化染色。將純的丙酮預先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮（放心，丙酮在此溫度不會為固體的）細胞爬片取出后，PBS洗2遍，便可加入冷丙酮于-20℃（丙酮有很強的揮發性，注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴，防止其揮發）固定10分鐘。取出后，室溫吹干，然后放入-20℃保存。2.多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別...
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