多聚賴氨酸一般常見的分子量有70,000~150,000,150,000~300,000和>300,000,分子量越大,黏附力越強,但相對充分溶解較困難。
原理:
多聚賴氨酸溶液是廣泛應用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產生較強的黏合力。培養瓶表面的性質對于細胞培養至關重要,細胞表面的糖蛋白(陰性)易于吸附在親水性的表面上,因而細胞培養表面如果有相當含量的陽性電荷更能促進細胞吸附,這正是運用多聚賴氨酸優化細胞培養表面的重要所在。
應用:
適用組織學,免疫組織化學,細胞涂片,冰凍切片,原位雜交等使用的玻片的防脫片處理,以防實驗操作過程中組織掉片。也可用于細胞培養,增加細胞貼壁能力。
溶液配制:
用去離子水溶解,配制成母液備用。保存于-20℃。
玻片處理:
1.滅菌水稀釋聚賴氨酸溶液,一般的使用濃度為0.01%。
2.將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。注意增加時間不會提高包被效果。
3.在60℃烘箱1小時干燥,或室溫18-26℃過夜干燥待用。
注意:
1.每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張, 超過90張片子將影響其黏合力。
2.用之前的玻片必須保持清潔。必要時用含1% HCl的70%乙醇溶液來清洗。
3.釋過的多聚賴氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3個月內是穩定的。
4.用過的稀釋液要過濾,若出現渾濁或長菌要丟棄
5.多聚賴氨酸濃度可以高一些,吸出來的可以重復利用至少20次。
培養瓶處理:
1.包被培養板或者是培養瓶,一般多聚賴氨酸濃度為0.01%,
2.準備100ml三蒸水,經高壓滅菌處理。
3.0.01%的多聚賴氨酸以50微升每平方厘米的量均勻涂于培養底物的表面,室溫下靜置5min,吸除多余液體。
4.加入滅菌水,反復沖洗三次,無菌操作。
5.處理后無菌晾干備用。
6.回收后保持無菌的多聚賴氨酸可反復利用。