試劑盒組成：

1， 封閉液（5%BSA）： 10ml。

2， Bio-羊抗兔IgG濃縮液： 100ul。

3， SABC-AP濃縮液： 100ul。

4， 稀釋液： 30ml。

5， 1×AP反應(yīng)緩沖液： 30ml

6， 25×BCIP： 1ml 25×NBT： 1ml

產(chǎn)品說(shuō)明： 本試劑盒適合于一抗為兔IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)AP顯色。 SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣，對(duì)生物素有極高的親和力，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大約可形成一百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

實(shí)驗(yàn)步驟：（以石蠟切片為例，僅作參考）1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯，三次乙醇)。2. 可選步聚：a、熱修復(fù)抗原， b、酶消化， c、跳過(guò)此步，直接進(jìn)入下一步。3.  滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗。4.  用稀釋液將一抗按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周），也可另行購(gòu)買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37 ℃ 1小時(shí)左右或20℃時(shí)2小時(shí)左右。也可4℃過(guò)夜。PBS（pH7.2-7.4）洗2分鐘×3次。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。具體稀釋度和孵育時(shí)間參考一抗生產(chǎn)廠家說(shuō)明書(shū)。）5． 根據(jù)用量，用稀釋液將Bio-羊抗兔IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗兔IgG濃縮液混勻。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分鐘。PBS（pH7.2-7.4） 洗2分鐘×3次。6．根據(jù)使用量，用稀釋液將SABC-AP濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-AP濃縮液混勻。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-AP工作液，20-37℃，30分鐘。PBS （pH7.2-7.4）洗5分鐘×4次。7．根據(jù)用量，1ml AP緩沖液中加入40ul NBT溶液，混勻后再加入40ul BCIP溶液。此工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。室溫顯色, 鏡下控制反應(yīng)時(shí)間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。* 對(duì)于冰凍切片，固定后，PBS漂洗兩次，接上述第二步。

注意事項(xiàng)： 如果染色背景過(guò)高，在SABC反應(yīng)之后，AP顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次，PBS洗2次，然后AP顯色。因?yàn)槊庖呓M化指標(biāo)眾多，標(biāo)本不一，此步驟僅作參考。

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標(biāo)題:miR-145 attenuates?phenotypic transformation of aortic vascular smooth muscle cells to prevent aortic dissection

成員:Zhi-Huang Qiu, Jian He, Tian-ci Chai, Yu-ling Zhang, Hao Zhou, Hui Zheng, Xiao-song Chen, Li Zhang, Yu-mei Li, Liang-wan Chen

論文因子:2.352 發(fā)表期刊:JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY ANALYSIS pmid:34767671

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

SABC(兔IgG)-AP?kit

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